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编 号:F015123
分子式:C11H7N2NaO3S2
分子量:302.3
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生物活性:
D-luciferin is the natural substrate of the enzyme luciferase (Luc) that catalyzes the production of the typical yellowgreen light of fireflies. The 560 nm chemiluminescence from this reaction peaks within seconds, with light output that is proportional to luciferase concentration when the substrate luciferin is present in excess. The luciferase (luc) gene is a popular reporter gene for research and agent screening. Chemiluminescent techniques are virtually background-free, making the luc reporter gene ideal for detecting low-level gene expression. As little as 0.02 pg of luciferase can be reliably measured in a standard scintillation counter. In addition to its role as a reporter of gene expression, luciferase is commonly used in an extremely sensitive assay for ATP. We of er the firefly luciferase (HY-P1004), luciferin free acid (HY-12591A), as well as its water-soluble sodium salts (HY-12591) and potassium salts (HY-12591B) .

体内研究:
使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因和 D-荧光素作为底物的生物发光成像 (BLI) 是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-荧光素注射后的时间作图,以生成时间-强度曲线。除了峰值信号外,D-荧光素注射后固定时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 的信号被确定为峰值信号的替代信号。给定时间-强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化,以表示 D-荧光素注射后的时间变化模式。注入 10 μL每克体重的 D-萤光素 (腹膜内或静脉内) 储备液:标准 150 mg/kg 注射的 20 g 小鼠通常约 200 μL。 解冻 D-萤光素 (钾盐或钠盐) 室温并溶解在 dPBS (不含钙或镁) 中,最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 的无菌 H2O 润湿0.22 μM 过滤器并丢弃水。通过准备好的 0.22 μM 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行消毒。

体外研究:
1. 注意事项 a) D-萤光素盐易溶于水性缓冲液 (pH 6.1-6.5),溶解度最高可达 100 mM。储备液可用不含 ATP 的水配制,并在 -20°C 下避光保存。游离酸必须用适当的碱中和才能溶解。在较高的 pH 值下,荧光素会在碱催化下形成脱氢荧光素,并外消旋化为 L-异构体。 b) D-荧光素可用于任何现有的报告分析或 ATP 分析系统。 c) 如果测试 ATP,请戴上手套并使用不含 ATP 的容器,以尽量减少所有可能的 ATP 污染源。仅使用无菌的无 ATP 水和试剂。使用高压灭菌水制备所有试剂。 2. 实验方案 本方案仅提供一个指导,应根据您的具体需要进行修改。 以下方案是钾和钾的示例钠盐制备。它适用于大多数细胞类型和体内动物使用。 2.1 体外生物发光图像分析的示例方案 a) 在无菌水中制备 100 mM (100-200X) 荧光素原液。拌匀。立即使用,或一次性分装,-20°C保存,避免冻融循环,避免光照。 b) 制备0.5-1 mM D-Luciferin工作液于pre-加热的组织培养基。 c) 从培养的细胞中吸出培养基。 d) 向细胞中加入荧光素工作溶液,并在成像前将细胞在 37°C 下孵育 5-10 分钟。 2.2 体内生物发光图像分析的示例方案 a) 在 DPBS 中制备 15 mg/mL 荧光素原液,不含 Mg2+ 和 Ca2+。混合均匀。 b) 过滤器通过 0.2 μM 过滤器对溶液进行除菌。立即使用,或一次性分装,并储存在 -20°C,避免冻融循环,避免暴露在光线下。 c) 成像前 10-15 分钟腹膜内 (ip) 注射荧光素在动物体重的 150 mg/kg (或 10 μL/g 荧光素原液) 下。注意:应对每个动物模型进行荧光素动力学研究以确定峰值信号时间。 2.3 荧光素报告基因检测的示例方案 a) 在无菌水中制备 100 mM 荧光素原液。立即使用,或一次性分装,-20°C 保存,避免冻融循环,避免暴露在光线下。 b) 制备 1 mM 的 D-Luciferin 工作溶液和 3 mM ATP,1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 在 25 mM Tricine 缓冲液 pH 7.8 中。 c) 将 5-10 μL 细胞裂解物移至微孔板中。使用裂解试剂或不含裂解物的缓冲液作为空白。 d) 根据制造商的说明用荧光素工作溶液灌注发光计。 e) 立即注入 200 μL 荧光素工作溶液,积分时间为 10 s.
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