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编 号:F296212
分子式:C11H8N2O3S2
分子量:280.32
产品类型
结构图
CAS No: 2591-17-5
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产品详情
生物活性:
D-luciferin is the natural substrate of the enzyme luciferase (Luc) that catalyzes the production of the typical yellowgreen light of fireflies. The 560 nm chemiluminescence from this reaction peaks within seconds, with light output that is proportional to luciferase concentration when the substrate luciferin is present in excess. The luciferase (luc) gene is a popular reporter gene for research and agent screening. Chemiluminescent techniques are virtually background-free, making the luc reporter gene ideal for detecting low-level gene expression. As little as 0.02 pg of luciferase can be reliably measured in a standard scintillation counter. In addition to its role as a reporter of gene expression, luciferase is commonly used in an extremely sensitive assay for ATP. We of er the firefly luciferase (HY-P1004), luciferin free acid (HY-12591A), as well as its water-soluble sodium salts (HY-12591) and potassium salts (HY-12591B) .
体外研究:
1. 注意事项 a) D-荧光素有三种形式,分别为游离态 (HY-12591A), 钾盐 (HY-12591B) 和钠盐 (HY-12591),钠盐和钾盐形式的 D-荧光素易溶于水性缓冲液 (pH 6.1-6.5),储备液可用无ATP的水配制,-20℃避光保存。游离态须用 DMSO 或者适当的碱中和才能溶解。在较高的 pH 值下,荧光素会在碱催化下形成脱氢荧光素,并外消旋化为 L-异构体。 b) D-荧光素可用于任何现有的报告分析或 ATP 分析系统。 c) 如果测试 ATP,请戴上手套并使用不含 ATP 的容器,以尽量减少所有可能的 ATP 污染源。仅使用无菌的无 ATP 水和试剂。使用高压灭菌水制备所有试剂。 2. 实验方案 本方案仅提供一个指导,应根据您的具体需要进行修改。2.1 体外生物发光图像分析的示例方案 a) 在 DMSO 中制备荧光素原液。拌匀。立即使用,或一次性分装,-20℃ 保存,避免反复冻融,避免光照。 b) 制备0.5-1 mM D-Luciferin工作液,预热组织培养基。 c) 从培养的细胞中吸出培养基。 d) 向细胞中加入荧光素工作液,并在成像前于 37℃ 孵育细胞 5-10 分钟。 2.2 体内实验 由于体内实验剂量较大,一般为 150 mg/kg,建议选择钾盐 (HY-12591B) 或者钠盐 (HY-12591) 产品。 2.3 荧光素报告基因检测的示例方案 a) 在 DMSO 中制备荧光素原液。立即使用,或一次性分装,-20℃ 保存,避免反复冻融,避免光照。 b) 配制 1 mM D-Luciferin 工作液和 3 mM ATP,1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 溶于 25 mM tricine 缓冲液 pH 7.8。 c) 将 5-10 μL 细胞裂解物移至微孔板中。使用裂解试剂或不含裂解物的缓冲液作为空白。 d) 根据制造商的说明用荧光素工作溶液灌注发光计。 e) 立即注入 200 μL 荧光素工作溶液,积分时间为 10 秒.